<cite id="d9bzp"></cite>
<cite id="d9bzp"><span id="d9bzp"></span></cite>
<cite id="d9bzp"><video id="d9bzp"></video></cite><var id="d9bzp"></var>
<var id="d9bzp"><video id="d9bzp"><thead id="d9bzp"></thead></video></var>
<menuitem id="d9bzp"><video id="d9bzp"></video></menuitem>
<var id="d9bzp"></var><cite id="d9bzp"><video id="d9bzp"></video></cite>
<cite id="d9bzp"></cite>
<var id="d9bzp"></var>
<var id="d9bzp"></var>
<var id="d9bzp"><video id="d9bzp"><thead id="d9bzp"></thead></video></var>

冠心病痰瘀证与载脂蛋白E基因多态性关系的研究

时间:2017-10-05 医学毕业论文 我要投稿

关载脂蛋白E(apolipoprotein E, ApoE)作为脂蛋白的组成部分和功能蛋白,对血脂代谢起调节作用, 编码ApoE基因的变异是影响血浆胆固醇浓度的重要遗传因素之一。已有报道证实:不同遗传背景人群的ApoE的基因多态性通过影响脂质代谢而与冠心病(coronary heart disease, CHD)的发病密切相关[1~3]。证候是中医认识和治疗疾病的根本,冠心病患者的临床表现以血瘀证和痰瘀互阻证为多见[4]。本研究对冠心病不同证候的发生和ApoE基因多态性的相关性进行了探讨,现报道如下。

  1  资料与方法

  1.1  病例纳入标准  选择在北京西苑医院和北京东方医院就诊的心肌梗死患者、或经冠状动脉造影及介入治疗确诊为冠心病的患者,这些患者均符合1999年美国心脏病协会AHA/WHO公布的冠心病分型和诊断标准[5]。然后对这些患者进行中医辨证确定证候类型。痰证、血瘀证、痰瘀互阻证、气虚证、阳虚证、阴虚证、气滞证、寒凝证等参考国家技术监督局发布的《中医临床诊疗术语・证候部分》(国家标准GB/T16751.21997)。

  1.2  病例排除标准  半年内曾有严重创伤或重大手术者;肾病综合征,甲状腺功能减退症,急性肝胆疾病及糖尿病患者;服用药物影响血脂代谢的患者;正在使用影响血脂代谢药物的患者。

  1.3  病例资料  按上述标准纳入不同证候类型的冠心病患者共200例,其中男105例,女95例;平均年龄(63.6±5.8)岁;其中痰证20例(10%),瘀证79例(39.5%),痰瘀互阻证82例(41%),非痰非瘀证19例(9.5%);身体质量指数(body mass index, BMI)为15.1~34.3 kg/m2。另选100名健康体检者作为对照组,其中男55名,女45名;平均年龄(62.1±7.8)岁;均无冠心病症状,常规心电图及超声心动图检查正常。以上样本人群均来自北京和河北地区,汉族,无血缘关系。所有病例均作标准基线问卷调查,结果记录于按临床流行病学要求设计的表格上。医师、患者和实验研究人员之间实行盲法。

  1.4  材料

  1.4.1  主要试剂  血清总胆固醇(total cholesterol, TC)和总甘油三酯(total triglycerides, TG)测定试剂盒购自法国申能公司;高密度脂蛋白胆固醇(highdensity lipoprotein cholesterol, HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein cholesterol, LDLC)测定试剂盒由日本第一化学药品株式会社提供;血脂测定多项质控物由卫生部临床检验中心提供;全血DNA纯化试剂盒(Wizard genomic DNA purification kit)、Taq DNA聚合酶、dNTPs、DNA分子量Marker(PCR Marker和pBR322Hae Ⅲ Marker)以及限制性内切酶HhaI均购自美国Promega公司;丙酰胺和NN’甲叉双丙酰胺,均购自北京鼎国生物技术公司。

  1.4.2  血样采集  患者空腹12 h后,静脉抽取2 ml血样,乙二胺四乙酸抗凝,用于提取DNA。

  1.4.3  引物  根据Richard 等[6]设计引物,序列为P1:5’AACAACTGACCCCGGTGGCG 3’;P2:5’ ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC 3’,均由北京鼎国生物技术公司合成。

  1.5  方法

  1.5.1  血脂水平的测定  测定TG采用胆固醇氧化酶过氧化物酶4氨基安替比林和酚法;测定TC采用脂蛋白脂肪酶甘油磷酸氧化酶过氧化物酶4氨基安替比林和酚法(GPOPAP酶法);测定HDLC采用选择性抑制法;测定LDLC采用选择性反应法。致动脉粥样硬化指数(atherogenic index, AI)的计算公式为:AI=(TC-HDLC)/HDLC。

  1.5.2  ApoE基因型的测定  采用全血DNA纯化试剂盒提取全血DNA。按《现代心脏内科学》[5]中的条件扩增ApoE基因的目的片段。反应体系:10倍缓冲液2 μl,浓度为2 mmol/L的dNTPs 2 μl,二甲基亚砜2 μl,浓度为2 μmol/L的引物各0.25 μl,2 U Taq酶,DNA模板100~200 ng,总体积20 μl。循环条件:95 ℃预变性8 min,然后95 ℃ 45 s、60 ℃ 45 s、72 ℃ 45 s,共35个循环后,72 ℃延伸8 min。经10%聚丙酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)检验扩增结果。取10 μl PCR产物加入10倍酶切缓冲液2 μl,小牛血清0.2 μl,浓度为10 U/μl的HhaI 0.5μl,去离子水7.3 μl。37 ℃反应4 h。产物用15% PAGE检测其基因型。

  1.5.3  样品测序  随机选取各基因型的PCR产物送北京鼎国生物技术公司进行序列测定。

冠心病痰瘀证与载脂蛋白E基因多态性关系的研究相关推荐
云南快乐十分哪个好_北京pK怎么玩-湖北快3怎么玩 国庆放假安排| 徐璐| 坏家伙们| 中央巡视组| 神雕侠侣古天乐版| 跨界设计师郭麒麟| 坏家伙们| 篮球公园| 武磊| 一吻定情|